硬安排的病理观测关于研讨骨骼、牙齿等器官疾病的开展具有很重要的含义。可是硬安排因为其自身硬度大难以被传统的薄片切开机直接切开，因而在切开之前往往需求脱钙处理，使其软化以到达刀片所可接受的硬度范围内进行切开。可是钙质作为骨骼和牙齿的组成部分，进行脱钙将不可避免的丢失所研讨器官中的信息，尤其是在含钙量高的牙釉质等部位中。一起，钙在前期硬安排愈合如牙质修正、骨伤口愈合等过程中也起着及其重要的效果。别的脱钙还不可避免的改变了硬安排的描摹，比如厚度改变、褶皱、软硬安排别离等问题。因而寻觅无需脱钙的切开办法关于研讨硬安排研讨是十分必要的。

  跟着激光技能的开展，这一难题有望得到处理。关于刀片切开来说，遭到刀片资料自身的约束，无法切开比刀片更硬的物体，可是这个困难在激光切开中并不存在 。但是激光切开也有其缺陷：先作为一种高能光束，其自身包含的能量较高简单灼伤物体外表，然后影响切开效果；别的遭到激光在穿透物体时将不可避免的被所穿透物体中的组分散射，然后约束了激光切开的深度。近几年开展较为敏捷的双光子聚集技能给激光3D切开带来了新的或许。

  完成对安排深层区域的切开；其次双光子的聚集点可以操控，可完成以往切开设备不能完成的3D切开；别的双光子一般都会选用近红外激光作为激发光源，这类激光往往具有佳穿深而且关于蛋白的吸收较低，根本不会灼伤样品。后双光子切开比较于传统打磨办法来说更为，样品的丢失更少。

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